2 × Taq Platinum PCR Mix

Siêu tinh khiết HotStart DNA polymerase có thể điều chỉnh nhiệt độ trung thực cao.

Taq Platinum DNA Polymerase là một polymerase HotStart Taq được biến đổi hóa học với hoạt tính exonuclease 3'-5 ′ và hoạt tính exonuclease 5'-3 ′. Hoạt động của enzyme Taq Platinum DNA Polymerase bị chặn ở nhiệt độ phòng. Hoạt động của nó chỉ có thể được kích hoạt sau khi gia nhiệt ở 94 ° C trong 5-10 phút, do đó tránh được hiện tượng khuếch đại không đặc hiệu gây ra bởi quá trình ủ không đặc hiệu hoặc ngâm mồi ở nhiệt độ thấp trước chu kỳ đầu tiên của phản ứng PCR, và cải thiện đáng kể độ nhạy và độ đặc hiệu của phản ứng PCR. Ngoài ra, Taq Platinum DNA Polymerase có độ trung thực rất cao, tốt thứ hai sau Pfu polymerase. Tốc độ kéo dài của quá trình trùng hợp DNA nhanh hơn Pfu polymerase và hiệu quả khuếch đại cao hơn.

Con mèo. Không Kích thước đóng gói
4992789 5x1ml
4992790 5 x 1 ml

Chi tiết sản phẩm

Ví dụ thử nghiệm

Câu hỏi thường gặp

Thẻ sản phẩm

Định nghĩa hoạt động

Hoạt động 1 đơn vị (U) Taq Platinum DNA Polymerase được định nghĩa là lượng enzyme cần thiết để kết hợp 10 nmol deoxynucleotide thành các chất không hòa tan trong axit ở 74 ° C trong vòng 30 phút sử dụng DNA tinh trùng cá hồi được hoạt hóa làm mẫu / mồi.

Kiểm soát chất lượng

Độ tinh khiết khi phát hiện SDS-PAGE là hơn 99%; Không có hoạt động của nuclease ngoại sinh được phát hiện; Gen sao chép đơn trong bộ gen người có thể được khuếch đại một cách hiệu quả; Không thay đổi hoạt tính đáng kể khi được bảo quản ở nhiệt độ phòng trong một tuần.

Các thông số kỹ thuật chính

Nó có hoạt tính exonuclease 5'-3 ′ và hoạt động exonuclease 3'-5 ′, và độ trung thực của nó là bên cạnh Pfu polymerase. Tốc độ mở rộng của Taq Platinum Polymerase nhanh hơn Pfu polymerase và hiệu quả khuếch đại cao hơn. Sản phẩm PCR có thể được nối trực tiếp đến đầu cùn hoặc được nhân bản bằng vector TA. Nếu hiệu quả nhân bản cần được cải thiện, nên làm sạch trước và thêm phần nhô ra 3'-dA trước khi nhân bản vào vector TA.

Taq Platinum MasterMix một ống (Chứng nhận Sản phẩm Công nghệ Cao Quốc gia)

■ Taq Platinum MasterMix đã cải thiện độ đặc hiệu và độ nhạy của phản ứng PCR và có thể khuếch đại các mẫu phức tạp với hàm lượng GC cao, cấu trúc thứ cấp và những thứ tương tự. Có thể khuếch đại tới 2 bản sao của mẫu mục tiêu, đảm bảo kết quả thí nghiệm chính xác hơn.

■ Công thức Taq Platinum MasterMix độc đáo làm cho toàn bộ hệ thống phản ứng rất ổn định và hoạt động sẽ không bị ảnh hưởng bởi quá trình đông lạnh-rã đông lặp đi lặp lại hoặc bảo quản lâu dài ở 4 ° C.

■ Dung dịch hỗn hợp PCR chuẩn bị trước ổn định và hiệu quả có thể làm cho thao tác nhanh chóng và đơn giản, giảm đáng kể cường độ lao động và sai số lấy mẫu. Bộ tăng cường và tối ưu hóa PCR hiệu suất cao cũng được bao gồm trong hỗn hợp, giúp giảm các yêu cầu về điều kiện PCR.

■ Sản phẩm này có cả hệ thống chứa thuốc nhuộm và không chứa thuốc nhuộm. Các sản phẩm MasterMix chứa thuốc nhuộm có thể được điện hóa trực tiếp sau PCR mà không cần thêm dung dịch đệm tải.

Các ứng dụng

Nó có thể thay thế Pfu polymerase để khuếch đại các sản phẩm có độ trung thực cao từ các khuôn mẫu phức tạp như bộ gen, và nó thích hợp cho các ứng dụng như nhân bản gen biểu hiện, đột biến theo vị trí cụ thể và phân tích đa hình nucleotide đơn (SNP), v.v.

Các lưu ý khi thiết kế mồi PCR:

Chiều dài lớp sơn lót thường là 20-25 mer. Tuy nhiên, khi thực hiện PCR đoạn dài, chiều dài đoạn mồi nên được tăng lên 30-35 mer.

■ Không có sự bắt cặp bổ sung giữa hai mồi, đặc biệt là đối với 3 gốc cuối cùng ở cuối 3 ′.

■ Hàm lượng GC nên ở mức 50-60% và tránh GC hoặc AT giàu địa phương. Để làm cho lớp sơn lót và khuôn liên kết ổn định, tránh cấu trúc giàu AT ở cuối 3 ′.

■ Tránh sơn lót tạo thành cấu trúc thứ cấp.

■ Chọn hai mồi có nhiệt độ Tm gần nhau.

Tính toán giá trị Tm của mồi cho PCR:

■ Khi lớp sơn lót nhỏ hơn 20 mer: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).

■ Khi lớp sơn lót lớn hơn 20 mer: Tm = 81,5 + 0,41 × (GC%) - 600 / L, trong đó L là chiều dài của lớp sơn lót.

■ Đặt nhiệt độ ủ ở (Tm-5) ° C.

Đầu vào PCR Primer

Có thể chọn nồng độ cuối cùng thích hợp của mồi trong khoảng 0,1 μM đến 1,0 μM. Nồng độ mồi quá thấp dẫn đến năng suất sản phẩm khuếch đại thấp, trong khi nồng độ mồi quá cao dễ xảy ra hiện tượng khuếch đại không đặc hiệu. Thông thường, khi lượng DNA khuôn mẫu lớn hoặc DNA khuôn mẫu phức tạp (chẳng hạn như DNA bộ gen người) được sử dụng làm khuôn mẫu, thì nồng độ mồi phải thấp hơn. Khi lượng DNA mẫu nhỏ hoặc DNA khuôn mẫu đơn giản (ví dụ, DNA plasmid, v.v.) được sử dụng làm khuôn mẫu, thì nồng độ mồi phải cao hơn.

Tất cả các sản phẩm có thể được tùy chỉnh cho ODM / OEM. Để biết chi tiết,vui lòng nhấp vào Dịch vụ tùy chỉnh (ODM / OEM)


  • Trước:
  • Kế tiếp:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental ExampleExperimental Example Sử dụng DNA bộ gen làm khuôn mẫu để khuếch đại đoạn 1 kb.Sau phản ứng PCR, lấy 5 μl để phát hiện điện di.
    Q: Không có dải khuếch đại

    Mẫu A-1

    ■ Tiêu bản có chứa tạp chất protein hoặc chất ức chế Taq, v.v. ——Làm sạch khuôn mẫu DNA, loại bỏ tạp chất protein hoặc chiết xuất DNA khuôn mẫu bằng bộ dụng cụ tinh chế.

    ■ Sự biến tính của mẫu không hoàn toàn —— Tăng nhiệt độ biến tính một cách thích hợp và kéo dài thời gian biến tính.

    ■ Giảm tiêu bản —— Chuẩn bị lại tiêu bản.

    A-2 Primer

    ■ Chất lượng mồi kém —— Tái tổng hợp mồi.

    ■ Phân hủy lớp sơn lót —— Chuyển các lớp sơn lót có nồng độ cao thành thể tích nhỏ để bảo quản. Tránh đông lạnh và rã đông nhiều lần hoặc bảo quản lạnh 4 ° C lâu dài.

    ■ Thiết kế sơn lót trong nhà (ví dụ như độ dài của lớp sơn lót không đủ, lớp sơn lót hình thành giữa các lớp sơn lót, v.v.) -Thiết kế lớp sơn lót (tránh hình thành lớp sơn lót và cấu trúc thứ cấp)

    A-3 Mg2+nồng độ

    ■ Mg2+ nồng độ quá thấp ——Đặc biệt tăng Mg2+ nồng độ: Tối ưu hóa Mg2+ nồng độ bằng một chuỗi các phản ứng từ 1 mM đến 3 mM với khoảng thời gian 0,5 mM để xác định Mg tối ưu2+ nồng độ cho từng tiêu bản và mồi.

    A-4 Nhiệt độ ủ

    ■ Nhiệt độ ủ cao ảnh hưởng đến sự kết dính của mồi và mẫu. —— Giảm nhiệt độ ủ và tối ưu hóa điều kiện với gradient 2 ° C.

    A-5 Thời gian gia hạn

    ■ Thời gian gia hạn ngắn —— Tăng thời gian gia hạn.

    Q: Dương tính giả

    Hiện tượng: Các mẫu âm tính cũng hiển thị các dải trình tự mục tiêu.

    A-1 Nhiễm PCR

    ■ Nhiễm bẩn chéo đối với trình tự đích hoặc các sản phẩm khuếch đại —— Cẩn thận không dùng pipet lấy mẫu chứa trình tự đích trong mẫu âm tính hoặc làm tràn chúng ra khỏi ống ly tâm. Thuốc thử hoặc thiết bị phải được hấp tiệt trùng để loại bỏ các axit nucleic hiện có, và sự tồn tại của tạp nhiễm phải được xác định thông qua các thí nghiệm đối chứng âm tính.

    ■ Nhiễm bẩn thuốc thử —— Quét sạch thuốc thử và bảo quản ở nhiệt độ thấp.

    A-2 Primer

    ■ Mg2+ nồng độ quá thấp ——Đặc biệt tăng Mg2+ nồng độ: Tối ưu hóa Mg2+ nồng độ bằng một chuỗi các phản ứng từ 1 mM đến 3 mM với khoảng thời gian 0,5 mM để xác định Mg tối ưu2+ nồng độ cho từng tiêu bản và mồi.

    ■ Thiết kế đoạn mồi không phù hợp và trình tự đích có sự tương đồng với trình tự không đích. ——Thiết kế lại lớp sơn lót.

    Q: Khuếch đại không cụ thể

    Hiện tượng: Các dải khuếch đại PCR không phù hợp với kích thước mong đợi, lớn hoặc nhỏ, hoặc đôi khi xảy ra cả hai dải khuếch đại cụ thể và dải khuếch đại không cụ thể.

    A-1 Primer

    ■ Tính đặc hiệu của mồi kém

    ——Thiết kế lại lớp sơn lót.

    ■ Nồng độ mồi quá cao ——Tăng nhiệt độ biến tính và kéo dài thời gian biến tính.

    A-2 Mg2+ nồng độ

    ■ Mg2+ nồng độ quá cao ——Đặc biệt giảm nồng độ Mg2 +: Tối ưu hóa Mg2+ nồng độ bằng một chuỗi các phản ứng từ 1 mM đến 3 mM với khoảng thời gian 0,5 mM để xác định Mg tối ưu2+ nồng độ cho từng tiêu bản và mồi.

    A-3 Polymerase có thể điều nhiệt

    ■ Lượng enzyme quá mức —— Giảm lượng enzyme thích hợp trong khoảng thời gian 0,5 U.

    A-4 Nhiệt độ ủ

    ■ Nhiệt độ ủ quá thấp —— Tăng nhiệt độ ủ một cách thích hợp hoặc áp dụng phương pháp ủ hai giai đoạn

    A-5 chu kỳ PCR

    ■ Quá nhiều chu kỳ PCR —— Giảm số chu kỳ PCR.

    Q: Các dải loang lổ hoặc có vết bẩn

    A-1 Primer——Đặc tính kém ——Thiết kế lại lớp sơn lót, thay đổi vị trí và độ dài của lớp sơn lót để nâng cao tính đặc hiệu của nó; hoặc thực hiện PCR lồng nhau.

    DNA mẫu A-2

    ——Tiêu bản không tinh khiết ——Làm sạch tiêu bản hoặc tách chiết DNA bằng bộ dụng cụ tinh chế.

    A-3 Mg2+ nồng độ

    ——Mg2+ nồng độ quá cao ——Đặc biệt giảm Mg2+ nồng độ: Tối ưu hóa Mg2+ nồng độ bằng một chuỗi các phản ứng từ 1 mM đến 3 mM với khoảng thời gian 0,5 mM để xác định Mg tối ưu2+ nồng độ cho từng tiêu bản và mồi.

    A-4 dNTP

    —— Nồng độ dNTP quá cao —— Giảm nồng độ dNTP một cách thích hợp

    A-5 Nhiệt độ ủ

    ——Nhiệt độ ủ quá thấp ——Tăng nhiệt độ ủ một cách thích hợp

    A-6 chu kỳ

    ——Quá nhiều chu kỳ ——Tối ưu hóa số chu kỳ

    Hỏi: Cần bổ sung bao nhiêu DNA khuôn mẫu trong hệ thống phản ứng PCR 50 μl?
    ytry
    Q: Làm thế nào để khuếch đại các đoạn dài?

    Bước đầu tiên là chọn polymerase thích hợp. Taq polymerase thông thường không thể đọc hiệu đính do thiếu hoạt tính exonuclease 3'-5 ', và sự không phù hợp sẽ làm giảm đáng kể hiệu quả kéo dài của các đoạn. Do đó, Taq polymerase thông thường không thể khuếch đại hiệu quả các đoạn mục tiêu lớn hơn 5 kb. Taq polymerase với sửa đổi đặc biệt hoặc polymerase có độ trung thực cao khác nên được lựa chọn để cải thiện hiệu quả mở rộng và đáp ứng nhu cầu khuếch đại đoạn dài. Ngoài ra, việc khuếch đại các đoạn dài cũng đòi hỏi sự điều chỉnh tương ứng về thiết kế mồi, thời gian biến tính, thời gian kéo dài, pH đệm,… Thông thường, mồi có 18-24 bp có thể dẫn đến năng suất tốt hơn. Để tránh làm hỏng mẫu, thời gian biến tính ở 94 ° C phải giảm xuống còn 30 giây hoặc ít hơn mỗi chu kỳ, và thời gian để tăng nhiệt độ lên 94 ° C trước khi khuếch đại phải ít hơn 1 phút. Hơn nữa, cài đặt nhiệt độ kéo dài ở khoảng 68 ° C và thiết kế thời gian kéo dài theo tốc độ 1 kb / phút có thể đảm bảo khuếch đại hiệu quả các đoạn dài.

    Q: Làm thế nào để cải thiện độ trung thực của bộ khuếch đại của PCR?

    Có thể giảm tỷ lệ lỗi của quá trình khuếch đại PCR bằng cách sử dụng các polymerase DNA khác nhau với độ trung thực cao. Trong số tất cả các polymerase DNA Taq được tìm thấy cho đến nay, enzyme Pfu có tỷ lệ lỗi thấp nhất và độ trung thực cao nhất (xem bảng đính kèm). Ngoài việc lựa chọn enzyme, các nhà nghiên cứu có thể giảm hơn nữa tỷ lệ đột biến PCR bằng cách tối ưu hóa các điều kiện phản ứng, bao gồm tối ưu hóa thành phần đệm, nồng độ polymerase ổn định nhiệt và tối ưu hóa số chu kỳ PCR.

    Viết tin nhắn của bạn ở đây và gửi cho chúng tôi